2016, vol. 66, br. 2, str. 203-213
|
|
Tipizacija izolata Campylobacter spp poreklom iz Republike Srbije primenom m-PCR i RAPD metoda
Typing of indigenous Campylobacter spp. from Serbia by m-PCR and RAPD
aInstitut za zemljište, Beograd, Srbija bInstitute of Veterinary Medicine, Jagodina cUniverzitet u Beogradu, Fakultet veterinarske medicine, Srbija dVojnomedicinska akademija, Beograd, Srbija
e-adresa: jelapet@gmail.com
Projekat: Novi autohtoni izolati bakterija Lysobacter i Pseudomonas kao važan izvor metabolita korisnih za biotehnologiju, stimulaciju rasta biljaka i kontrolu bolesti bilja: od izolata do preparata (MPNTR - 46007)
Unapređenje i razvoj higijenskih i tehnoloških postupaka u proizvodnji namirnica životinjskog porekla u cilju dobijanja kvalitetnih i bezbednih proizvoda konkurentnih na svetskom tržištu (MPNTR - 46009)
Sažetak
Kampilobakterioza je infektivna bolest ljudi izazvana termofilnim bakterijama roda Campylobacter, uglavnom vrstama C. coli i C. jejuni. Jedan je od vodećih uzroka gastroenteritisa, pri čemu broj obolelih premašuje broj infekcija Salmonella vrstama. Epidemiologija uzročnika nije u potpunosti rasvetljena, ali je u mnogim istraživanjima naglašena uloga pilećeg mesa u infekciji ljudi. Cilj ovog istraživanja bio je ispitivanje diverziteta Campylobacter vrsta prisutnih u Republici Srbiji i uspostavljanje brzog i pouzdanog sistema za potvrdu i tipizaciju dobijenih izolata. Ispitivani su uzorci uzeti sa farmi brojlera i iz klanica živine, kao i 2 izolata poreklom od ljudi. Identifikacija izolata vršena je primenom multiplex-PCR-a. Genotipizacija je vršena primenom analize nasumično umnožene polimorfne DNA (RAPD) sa više prajmera. Primenom prajmera neuobičajenih za ispitivanje Campylobacter vrsta i jednog novodizajniranog (DJP17), dobijeni su RAPD profili autohtonih Campylobacter izolata. Stepen diskriminacije izolata zavisio je od primenjenih prajmera: prajmeri SPH1 i AG15 bili su delimično informativni, dok su prajmeri AP10, AK16 i DJP17 dali bolje rezultate.
Abstract
Campylobacteriosis is an infectious human disease caused by thermophilic Campylobacter species, mainly C. jejuni and C. coli. It is the leading cause of human gastroenteritis today with the number of cases surpassing the number of Salmonella poisoning cases. The epidemiology of the agent is not completely clear, but a number of investigations indicate an important role of broiler meat in human infections. The purpose of this study was to investigate the diversity of Campylobacter jejuni strains present in the Republic of Serbia and to determine a fast and reliable system for the confirmation and typing of the isolated strains. Samples taken at slaughterhouses, broiler farms, as well as two human isolates of Campylobacter species have been investigated. Strain identification was performed by multiplex-PCR. Genotyping was performed by Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) with multiple primers. Using several unusual primers and a newly designed one (DJP17), we report on the RAPD types of indigenous Campylobacter species. RAPD profiles showed different levels of discrimination between the isolates, depending on the primer: SPH1 and AG15 were informative only in part and better results were obtained with AP10, AK16 and DJP17.
|