2016, vol. 66, br. 3, str. 304-316
|
|
Diferencijacija Pseudomonas i Stenotrophomonas vrsta izolovanih iz riba primenom molekularnih metoda i MALDI-TOF metode
Differentiation between Pseudomonas and Stenotrophomonas species isolated from fish using molecular and MALDI-TOF method
aUniverzitet u Beogradu, Fakultet veterinarske medicine, Srbija bUniverzitet u Beogradu, Tehnološko-metalurški fakultet, Srbija cUniverzitet u Beogradu, Institut za molekularnu genetiku i genetičko inženjerstvo, Srbija dLaboratory for Human Ecology and Ecotoxicology, Institute of Public Health Belgrade, Belgrade eCentral Laboratory, Biocentre Ltd., Zagreb, Croatia fLaboratory for System Biomedicine and Centre for Proteomics and mass spectrometry, 'Ruđer Bošković' Institute, Zagreb, Croatia
e-adresa: dusan@vet.bg.ac.rs
Projekat: Uvođenje i evaluacija nove molekularne metode za brzo otkrivanje mecA gena stafilokoka direktno u brisevima uzetim od ljudi, životinja i iz njihovog okruženja (MPNTR - 31079)
Sažetak
S obzirom na značaj stečene rezistencije Pseudomonas vrsta, kao i na intrinzičnu rezistenciju Stenotrophomonas vrsta, a u cilju preciznog ispitivanja osetljivosti na antibiotike, neophodna je jasna diferencijacija pripadnika ovih rodova bakterija. U tom cilju su u identifikaciji 51 izolata poreklom od riba korišćene metode: standardni PCR, 16S rRNA sekvenciranje gena, MALDI-TOF. Rezultati standardnog PCR testa, 16S rRNA sekvenciranja gena i MALDI-TOF analize su za 35 sojeva potvrdili pripadnost rodu Pseudomonas. Standardnim PCR testom i primenom aparata VITEK MS utvrđeno je da 10 sojeva pripada vrsti Stenotrophomonas maltophilia. U 16S rRNA sekvenciranju gena 3 soja koja su bila pozitivna u oba standardna PCR testa identifikovana su kao 99% Pseudomonas sp. i 99% Stenotrophomonas sp. VITEK MS je ova tri soja u prvoj identifikaciji identifikovao kao 99% Stenotrophomonas, a u ponovljenoj identifikaciji kao 99% Pseudomonas. Ti sojevi su na aparatu MALDI TOF/TOF 4800 Plus bili identifikovani kao Stenotrophomonas. U 16S rRNA sekvenciranju gena tri soja koja su bila negativna u oba standardna PCR testa su identifikovana kao 99% Pseudomonas sp. i 99% Stenotrophomonas sp. Aparat VITEK MS je ova tri soja identifikovao u jednoj identifikaciji kao 99% Stenotrophomonas, a u drugoj identifikaciji 99% kao Pseudomonas. Ti sojevi su na aparatu MALDI TOF/ TOF 4800 Plus bili identifikovani kao Stenotrophomonas. Iako su u ovom istraživanju korišćene savremene metode ispitivanja koje imaju vrlo visoku specifičnost (PCR, 16s rRNK sequencing, MALDI TOF) precizna diferencijacija Pseudomonas i Stenotrophomonas vrsta nije mogla biti postignuta.
Abstract
For the purpose of precise antibiotic susceptibility testing it is necessary to clearly distinguish Pseudomonas and Stenotrophomonas genera, considering acquired resistance of Pseudomonas species, as well as the intrinsic resistance of Stenotrophomonas species. This is why in the identification of the 51 isolates originated from fish, the following methods were used: standard PCR, 16S rRNA gene sequencing, and MALDI-TOF. The results of the standard PCR test, 16S rRNA gene sequencing and MALDI-TOF analysis confirmed 35 strains to belong to the Pseudomonas genus. Standard PCR test and VITEK MS device confirmed that 10 strains belong to Stenotrophomonas maltophilia species. Three strains were positive in both standard PCR tests for Pseudomonas and Stenotrpohomonas. 16S rRNA gene sequencing identified these 3 strains to be 99% Pseudomonas sp. and 99% Stenotrophomonas sp. VITEK MS first identified these three strains as 99% Stenotrophomonas, and in the repeated identification it identified them as 99% Pseudomonas. MALDI TOF/TOF 4800 Plus device identified these strains as Stenotrophomonas. Three strains were negative in both standard PCR tests for Pseudomonas and Stenotrpohomonas. 16S rRNA gene sequencing identified these 3 strains to be 99% Pseudomonas sp. and 99% Stenotrophomonas sp. VITEK MS first identified these three strains as 99% Stenotrophomonas, and in the repeated identification it identified them as 99% Pseudomonas. MALDI TOF/TOF 4800 Plus device identified these strains as Stenotrophomonas. Although modern test methods that have very high specificity (PCR, 16S rRNA gene Pseudomonas and Stenotrophomonas species for 6 isolates could not be reached using the above mentioned methods.
|