2016, vol. 66, br. 4, str. 444-454
|
|
Real-time PCR testovi za specifičnu detekciju terenskih balkanskih sojeva virusa bolesti kvrgave kože
Real-time PCR assays for the specific detection of field Balkan strains of lumpy skin disease virus
aDepartment for Laboratory Diagnostic, Veterinary Specialized Institute 'Kraljevo', Kraljevo bNaučni institut za veterinarstvo 'Novi Sad', Novi Sad, Srbija cInstitute of Diagnostic Virology, Friedrich-Loeffler Institut, Greifswald-Insel Riems, Germany
e-adresa: vidanovic@vsikv.com
Projekat: Preklinička ispitivanja bioaktivnih supstanci (MPNTR - 41010)
Praćenje zdravstvenog stanja divljači i uvođenje novih biotehnoloških postupaka u detekciji zaraznih i zoonoznih agenasa - analiza rizika za zdravlje ljudi, domaćih i divljih životinja i kontaminaciju životne sredine (MPNTR - 31084)
Sažetak
Bolest kvrgave kože (Lumpy skin disease, eng. - LSD) je važno oboljenje goveda koje se zbog svog velikog ekonomskog značaja nalazi na OIE listi bolesti obaveznih za prijavljivanje. Etiološki agens je virus bolesti kvrgave kože goveda (Lumpy skin disease virus, eng. - LSDV). U kontroli LSD uspešno se kao vakcina u zaraženim područjima koriste atenuirani sojevi LSDV i Sheep pox virus, eng. - SPPV. U slučaju politike sprovođenja vakcinacije, zbog mogućnosti blagih ili sistemskih reakcija nakon vakcinacije kod vakcinisanih životinja, primena dijagnostičkih metoda koje će brzo i specifično razlikovati terenske sojeve LSDV od vakcinalnih je izuzetno važna. Brzina u dijagnostici i neškodljivom uklanjanju zaraženih životinja su jedan od ključnih faktora u prevenciji širenja bolesti. U predstavljenom radu opisali smo razvoj i validaciju dva real time TaqMan PCR testa za brzu, osetljivu i specifičnu detekciju virulentnih terenskih sojeva LSDV koji trenutno kruže na Balkanskom poluostrvu. Specifičnost za terenske sojeve i isključivost za vakcinalne sojeve je ispitana na 171 uzorku prirodno zaraženih i vakcinisanih životinja. Rezultati ovog istraživanja pokazuju da su real-time PCR testovi bili osetljiviji od konvencionalnog nested PCR u otkrivanju terenskih sojeva LSDV čime se omogućava brzo ispitivanje terenskih sojeva LSD visoke propusne moći. Kao zaključak, oba real-time PCR testa, KV-2 i FLI, koja su opisana u ovom radu su jednostavna, osetljiva, i pogodna za rutinsku upotrebu u dijagnostičkim laboratorijama i imaju potencijal da zamene konvencionalni nested PCR test, kao standardni postupci za otkrivanje terenskih sojeva LSDV u kliničkim uzorcima.
Abstract
Lumpy skin disease (LSD) is an important disease of cattle which is included in the OIE list of notifiable terrestrial animal diseases because of its great economic importance. The etiological agent is the Lumpy skin disease virus (LSDV). In the control of LSD attenuated strains of LSDV and SPPV are successfully used as vaccine strains in infected areas. In the case of vaccination policy, due to the possibility of mild or systemic post-vaccination reactions in vaccinated animals, the application of diagnostic procedures that will rapidly and specifically differentiate LSDV field strains from LSD vaccine virus strains are extremely important. Rapidity in diagnostics and disposal of infected animals is one of the key factors in the prevention of spreading the disease. In the presented study we have described the development and validation of two real time TaqMan-PCR assays for a rapid, sensitive and specific detection of the virulent field LSDV strain currently circulating in the Balkan Peninsula. Specificity for the field strain and exclusivity for vaccine strains was tested on 171 samples from naturally infected and vaccinated animals. The results of this study show that both developed real-time PCR assays are more sensitive than the conventional nested PCR in detecting field LSDV strains thus enabling rapid and high-throughput detection of animals infected with field strains of LSDV. In conclusion, both KV-2 and FLI real-time PCR assays described in this study are simple, rapid, sensitive and suitable for routine use in a diagnostic laboratory and have the potential to replace conventional nested gel-based PCR assays as the standard procedure for the detection of field strains of LSDV in clinical samples.
|