2018, vol. 72, br. 2, str. 68-79
|
|
Standardne i molekularne metode dijagnostike infekcija izazvanih konjskim herpesvirusima 1 i 4
Standard and molecular methods in the diagnostics of infections caused by equine herpesviruses 1 and 4
Sažetak
Uvod. Konjski herpesvirus 1 (EHV-1) izaziva respiratorne infekcije mladih konja, promene u CNS-u i pojavu abortusa kod gravidnih kobila. Infekcije izazvane konjskim herpesvirusom 4 (EHV-4) se manifestuju ispoljavanjem respiratornih simptoma oboljenja kod životinja, a ređe pojavom abortusa. Infekcije izazvane prethodno navedenim virusima prisutne su u populaciji konja širom sveta. Cilj i pristup. U cilju laboratorijske dijagnostike, odnosno izrade odgovarajućih epizootioloških studija o prisustvu virusa EHV-1 i EHV-4 u populaciji konja na određenom prostoru, primenjuju se serološke metode kao što su ELISA ili test virus neutralizacije. Primenom navedenih metoda se vrši otkrivanje prisustva i titra specifčnih antitela protiv prethodno navedenih virusa u uzorcima krvnih seruma konja. Ovde treba napomenuti da su danas dostupni i komercijalni kitovi za izvođenje metode ELISA koji omogućavaju diferencijaciju specifčnih EHV-1 i EHV-4 antitela. Konjski herpesvirus 1 i konjski herpesvirus 4 se mogu izolovati na kulturama ćelija poreklom od konja, kao i na drugim ćelijskim linijama, a daju karakterističan citopatogeni efekat. Pored navedenih klasičnih virusoloških metoda, danas su u upotrebi i molekularne metode dijagnostike kao što su PCR ili real-time PCR. Ključni nalazi i zaključak. Lančana reakcija polimeraze (PCR) predstavlja pogodnu screening metodu za brzo i pouzdano otkrivanje prisustva virusa EHV-1 i EHV-4 u ispitivanim uzorcima poreklom od konja. Real-time PCR je osetljiva, specifčna i kvantitativna metoda čijom primenom se takođe može utvrditi prisustvo navedenih virusa u organizmu konja. Metodom sekvenciranja genoma virusa EHV-1 i EHV-4 se mogu utvrditi sličnosti ili razlike između pojedinih sojeva virusa, odnosno može se izvršiti molekularna karakterizacija sojeva virusa EHV-1 i EHV-4 dominantno prisutnih u populaciji konja na određenoj teritoriji.
Abstract
Equine herpesvirus type 1(EHV-1) is responsible for respiratory disease in young animals, abortion in pregnant mares and neurological disease, whilst equine herpesvirus 4 (EHV-4) is mainly the causative agent of respiratory disorders and rarely causes abortion. These viruses are considered as one of the most clinically and economically important pathogens of horses and can be detected in a range of tissues. Serological methods are used to detect the presence and titre of specific antibodies to equine herpesvirus 1 and 4 in the sera of examined horses and are useful in epizootiological studies. Commercially available ELISA kits are able to differentiate specific EHV-1 and EHV-4 antibodies. Equine herpesvirus-1 and equine herpesvirus-4 can both be isolated using susceptible cells such as primary horse cell cultures and other non-equine cells with visible cytopathic effect. Since standard diagnostic methods can be time consuming and arduous, the scope of many studies has been to develop and confirm the sensitivity and specificity of molecular diagnostic methods. Polymerase chain reaction (PCR) has proved to be a good screening method for the presence of latent infections of horses caused by these viruses, also making possible the rapid identification and differentiation of EHV-1 and-EHV-4 in the examined samples. Real-time PCR is a sensitive, specific and quantitative method that enables the determination of viral kinetics in infected horses. Genome sequencing can be used to discover mutations in the genomes of EHV-1 and EHV-4 as well as to track the spread of their different strains globally.
|